多肽一級結(jié)構(gòu)，二級結(jié)構(gòu)鑒定是多肽分析鑒定的關(guān)鍵方法，多肽一級結(jié)構(gòu)有氨基酸組成分析，質(zhì)譜分析，氨基酸序列分析。二級結(jié)構(gòu)包含：X-衍射，NMR，圓二色譜（CD）等。以下是合成多肽二級結(jié)構(gòu)的分析鑒定和純度分析。

合成多肽二級結(jié)構(gòu)的分析：

X-衍射

X-衍射可以獲得有關(guān)化合物晶型的直接信息和相對與構(gòu)型。

核磁共振(NMR)

二維、三維以及四維NMR伴隨分子生物學(xué)、計算機(jī)處理技術(shù)的發(fā)展而取得應(yīng)用，這致使NMR逐步變?yōu)榇蠓肿咏Y(jié)構(gòu)物質(zhì)分析的主要方法之一。NMR能夠用確定來氨基酸序列、分布以及構(gòu)象。到現(xiàn)在為止，NMR能夠十分精確且快速地取得分析結(jié)果，這對分子中不超郭30個氨基酸的小肽的有非常大的分析作用。

圓二色譜（CD）

要想獲得生物大分子的二級結(jié)構(gòu)，圓二色譜需對蛋白質(zhì)等生物大分子的圓二色光譜進(jìn)行測量，其快捷，簡單，在酶動力學(xué)，蛋白質(zhì)構(gòu)象研究，蛋白質(zhì)折疊等方面獲得廣泛的使用。是一種特殊的吸收譜。

肽鏈為圓二色譜紫外區(qū)間的主要生色團(tuán)，這一波長范圍的CD譜中含有生物大分子主鏈構(gòu)象的數(shù)據(jù)。在220nm附近無規(guī)則卷曲構(gòu)象的CD譜有一小而寬的正峰，198nm附近有一負(fù)峰；α-螺旋構(gòu)象的CD譜在190nm附近有一正峰，在222nm、208nm處有一負(fù)峰。β-折疊構(gòu)象的CD譜在195-198nm處有一強(qiáng)的正峰，在217-218nm處有一負(fù)峰。

純度分析：

多肽的純度分析往往都會使用HPLC辦法，選取洗脫梯度，5%B--65%B，時長30min，RP-C18，顆粒直徑5μm，孔徑300A，4.6×150mm，流動相：A，0.1%TFA/H2O；B，0.1%TFA/ACN。有一部分短肽鑒于具有很強(qiáng)的親水性，在C18上保留比較弱，就需要對條件進(jìn)行調(diào)整，具體的辦法有以下兩種：

1.在流動相中添加七氟丁酸，十八烷基磺酸鈉等強(qiáng)離子對試劑。

2.對分析梯度進(jìn)行調(diào)整，要把起始梯度換成2%，等度或小梯度洗脫。

寫到最后:

杭州固拓生物科技有限公司定制多肽合成業(yè)務(wù):藥物肽、臨床肽、訂書肽、淀粉肽、醛肽、環(huán)肽、二硫鍵搭橋多肽、穿膜肽、各種抗菌肽、美容肽、磷酸化肽、PEG肽、偶聯(lián)BSA和KLH抗原肽、各類酸修飾多肽、各種胺類化合物修飾多肽(苯胺、異戊胺、二乙胺)、各類榮光標(biāo)記(FITC、FAM系列、DOTA、TAMRA系列、Cy系列)同位素肽等。

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