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凍干肽的儲(chǔ)存凍干肽在環(huán)境溫度下運(yùn)輸 ,而且能長(zhǎng)期保持數(shù)天至幾個(gè)星期 。 如要長(zhǎng)期性儲(chǔ)存 ,則應(yīng)儲(chǔ)存 在-20 °C或更低溫度 ,避開(kāi)強(qiáng)光照 , 曝露于水份會(huì)減少凍干肽的長(zhǎng)時(shí)間可靠性。在應(yīng)用肽以前,從冷凍中取下 ,使肽均衡至室內(nèi)溫度 ,隨后取下器皿的外蓋 , 這將降低消化吸收邊上空氣中具有的水份 。
活性多肽溶解可以溶解全部?jī)龈呻模c此同時(shí)還能在生物測(cè)定中維持其一致性和相溶性的通用性溶劑是不會(huì)有的。 挑選最好溶劑可能是“不斷 實(shí)驗(yàn) ”全過(guò)程的結(jié)果 。在可用的情況下,提議最先試著根據(jù)凍干相對(duì)性非常容易除去的溶劑,防止最開(kāi)始使用的溶劑不溶解肽。在溶解全部肽試品以前 ,盡量 先只檢測(cè) 一部分肽。
下列 流程 給予 了溶解 肽的一般手冊(cè) 。
針對(duì)所運(yùn)用的什么溶劑 ,在試著這種方式以前 ,應(yīng)考慮到您的測(cè)量對(duì)溶劑的耐受力, 明確活性多肽的溶解特點(diǎn)評(píng)定肽的碳水化合物構(gòu)成是掌握肽的溶解特點(diǎn)的基本專(zhuān)用工具 。
肽中正離子正電荷的數(shù)目和種類(lèi)決策了其在水溶性水溶液中的溶解性般 ,肽所具備的通電殘基越多,就更便于溶解水溶性水溶液 。
一定要注意 ,因?yàn)?/span>肽一般在pH6-8時(shí)比在pH2-6時(shí)有大量正電荷,因而他們在達(dá)到中性pH 下更很有可能能夠更好地溶解 。 除外是肽序列十分親水性而且趨向于凝結(jié) 。
盡管序列的疏水性可以是凝的首要緣故 ,但肽也會(huì)根據(jù)普遍的氫鍵引線(xiàn)鍵合凝結(jié)或“疑膠化”。 依照下列手冊(cè)明確肽是偏堿 ,酸性或是中性:第1步:為每一個(gè)酸性殘基(D,E和C-尾端 COOH分派一個(gè) -1值。
第2步:為每一個(gè)偏堿殘基(K,R和N尾端 NH2)分派 一個(gè) +1值。
第3步:在pH <6時(shí)為每一個(gè) H殘基分派 一個(gè) +1值,在pH >6時(shí)分派數(shù)值零。
第4步:將這種值求和測(cè)算出肽在pH7時(shí)的總電荷數(shù)(全部 D,E,K,R,C-尾端 COOH和N-尾端 NH2),進(jìn)而獲得肽的總凈電荷。
通電肽的溶解方式假如肽的總凈電荷為負(fù),則肽被覺(jué)得是酸性的。 假如肽是酸性的,且/或假如肽在pH7下的總電荷數(shù)超過(guò)殘基數(shù)量的25%,則添加小量0.1 M硝酸鉀來(lái)溶解肽,隨后自來(lái)水溶解稀釋到要的濃度值 。保證肽水溶液的最后pH值約為7,依據(jù)必須調(diào)整 pH值。
偏堿肽(凈電荷為正)假如肽的總凈電荷為正,則肽被覺(jué)得是偏堿的。 假如肽是偏堿的,且/或假如肽在pH7下的總電荷數(shù)處于殘基數(shù)量的10%至25 %,則添加小量25%的甲酸來(lái)溶解肽,隨后自來(lái)水溶解稀釋到要求的濃度值 。
中性肽(凈電荷為零)假如肽的總凈電荷為零,則肽被覺(jué)得是中性的。 假如正電荷數(shù)量超過(guò)殘基數(shù)量 的25 %,則應(yīng)用酸性肽的溶解方式 。 別的要素假如肽的總電荷數(shù)低于殘基數(shù)量的10 %,則提議應(yīng)用有機(jī)溶液 ,在試著更強(qiáng)溶劑以前 ,超聲解決肽水溶液以確定肽不溶解選定溶劑。
超聲解決提高溶解功效 ,將固態(tài)肽粉碎成更小的顆粒物 。
假如超聲解決后水溶液疑膠化,發(fā)生渾濁或有由此可見(jiàn)顆粒物 ,則肽未徹底溶解反而是飄浮 。 這說(shuō)明必須更強(qiáng)的溶劑 , 假如肽不溶解 ,則凍干并去除揮發(fā)物緩沖溶液 ,試品干燥后,可以在同一 試品上檢測(cè)此外的溶劑 。
親水性 /不通電肽的溶解方式針對(duì)帶有超過(guò)50%親水性殘基的肽序列 ,通電碳水化合物成分小于 25 %的中性肽,和/或通電碳水化合物成分小于10%的肽,提議應(yīng)用有機(jī)溶液 。
提議應(yīng)用乙腈 (ACN ),二甲基亞砜 (DMSO )或二甲基甲酰胺 (DMF )。 加上 離液序列高的化學(xué)物質(zhì) ,如鹽酸胍或尿素溶液 ,可以根據(jù)破壞氫鍵互聯(lián)網(wǎng)推動(dòng)破壞親水性相互影響或降低肽的“膠凝 ”。
在挑選流程中,應(yīng)考慮到您的測(cè)量對(duì)這種有機(jī)化學(xué)或離液序列高的實(shí)驗(yàn)試劑的耐受力 。 帶有Cys(C)和Met (M)的肽序列在DMSO中不穩(wěn)定。
關(guān)鍵的是將肽徹底溶解在最開(kāi)始應(yīng)用的溶劑(比如 甲酸 ,乙腈,DMSO或DMF)中,由于肽溶解到這種溶劑中的速度一般高過(guò)水/溶劑混合物質(zhì)中的溶解速度 。 假如最先自來(lái)水 /溶劑混合物質(zhì)來(lái)溶解肽,最后也許會(huì)向肽試品中多余地添加很多非水溶性溶劑 。
也很有可能必須應(yīng)用超聲解決來(lái)推動(dòng)肽徹底溶解 ,當(dāng)肽溶解于原始溶劑之后 ,尤其是溶解于有機(jī)溶液中的這些溶劑之后 ,將肽水溶液逐滴遲緩地添加到緩沖液中,一邊添加 ,一邊輕輕地均速拌和 ,以稀釋液肽。
這類(lèi)辦法可以避免肽在水溶性水溶液中的部分濃縮 ,這類(lèi)部分濃縮有可能造成肽沉淀 , 那樣做的好處是,可以在視覺(jué)上觀察到肽沉淀 ,并相對(duì)應(yīng)地采取一定的有效措施 。
寫(xiě)到最后:
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