近期，將來技術(shù)學院生物醫(yī)學工程系陳匡時教授課題組根據(jù)雙分子熒光互補（BimolecularFluorescenceComplementation，BiFC）技術(shù)，發(fā)展了一種還可以在納米限度下科學研究體細胞內(nèi)蛋白相互作用的新型顯像技術(shù)。該技術(shù)克服了傳統(tǒng)式BiFC技術(shù)易造成假陽性數(shù)據(jù)信號的難題，并被用來在納米限度下分析宿主細胞關(guān)鍵蛋白參加HIV-1病毒組裝的工作模式。該科研成果已發(fā)布于學術(shù)刊物ACSNano，題型為“ABackgroundAssessableandCorrectableBimolecularFluorescenceComplementationSystemforNanoscopicSingle-MoleculeImagingofIntracellularProtein-ProteinInteractions”。

BiFC技術(shù)是一種可在人體細胞內(nèi)顯像蛋白相互作用的方式 ，其基本原理是將一個完全的熒光蛋白切分成2個非熒光精彩片段，再將這兩個非熒光精彩片段各自與將會產(chǎn)生相互作用的2個總體目標蛋白聯(lián)接產(chǎn)生融合蛋白，當總體目標蛋白在人體細胞內(nèi)相互作用時，這兩個非熒光精彩片段會因為室內(nèi)空間間距的挨近產(chǎn)生完善的熒光蛋白。殊不知，在總體目標蛋白不產(chǎn)生相互作用的情形下，2個非熒光精彩片段也有可能因為任意碰撞而自組裝成完全的熒光蛋白，造成假陽性數(shù)據(jù)信號，這限定了BiFC技術(shù)對總體目標蛋白相互作用的定量分析法。為了更好地克服這一難題，陳匡時課題組研發(fā)了一種可以檢驗并解決這類由非熒光精彩片段自組裝造成的假陽性數(shù)據(jù)信號的方式 ，并將其取名為BAC-BiFC（BackgroundAssessableandCorrectable-BimolecularFluorescenceComplementation）（圖1）。從總體上，她們給BiFC中的一個總體目標蛋白聯(lián)接上一個參照熒光蛋白，該參照熒光蛋白不但可以用來表現(xiàn)總體目標蛋白在人體細胞內(nèi)的體現(xiàn)程度與空間布局，還促使研究者能夠根據(jù)比例顯像分辨不一樣基因表達水準下假陽性數(shù)據(jù)信號的高低，進而得到 不會受到假陽性信號干擾的試驗標準。

“根據(jù)發(fā)展新的超分辨BiFC技術(shù)，大家發(fā)覺宿主細胞AGO2蛋白參加了HIV-1病毒顆粒組裝的整個過程，是病毒增殖不可或缺的原件。這一發(fā)覺有希望為HIV病毒和別的逆轉(zhuǎn)錄病毒的分析給予新的角度?！标惪飼r表明。

在HIV-1病毒的增殖全過程中，其結(jié)構(gòu)蛋白Gag需要與眾多宿主細胞蛋白產(chǎn)生相互作用以進行病毒顆粒的組裝與發(fā)芽。研究者運用BAC-BiFC技術(shù)，在納米限度下對Gag蛋白與宿主細胞蛋白AGO2中間的相互作用開展了科學研究【根據(jù)融合超分辨率顯微鏡技術(shù)directstochasticopticalreconstructionmicroscopy（dSTORM）完成】。與先前的分析結(jié)果不一樣，研究者發(fā)覺Gag蛋白并不是只受體病毒顆粒包裝固定不動數(shù)量的AGO2，只是在病毒組裝后期招募了大量的AGO2（圖2），這提醒AGO2參加了HIV-1病毒顆粒組裝的整個過程，是病毒增殖不可或缺的原件。這一發(fā)覺有希望為HIV-1病毒和別的逆轉(zhuǎn)錄病毒的分析給予新的角度。值得一提的是，除開本工作所涉及到的研究對象外，BAC-BiFC技術(shù)也具備對生命歷程中其它各類蛋白相互作用甚至其它生物分子中間的相互作用開展可視化科學研究的發(fā)展?jié)摿Α?/span> 

 寫到最后：

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