1.酰基疊氮法

?；B氮法早在1902年就被引入肽化學(xué)。因此，這種方法是最古老的冷凝方法之一。在縮肽反應(yīng)過程中，氨基酸很少用疊氮法外消旋，因此這種方法被肽合成工作者廣泛采用。最近，中國學(xué)者李清庚用這種方法成功合成了一系列谷氨酰胺類抗腫瘤化合物。疊氮肽接枝分為三步。首先是羧基部分被甲酯、乙酯、芐酯等保護(hù)的肽。在室溫下進(jìn)行酰肼水解，然后酰肼與亞硝酸鹽在低溫(低于-15℃)和酸性條件下反應(yīng)生成疊氮化物，最后用有機(jī)堿調(diào)節(jié)酸堿度至8-9，加入氨基組分完成肽接枝反應(yīng)。機(jī)理如下。

此外，還發(fā)現(xiàn)了一種磷酸鹽縮合試劑DPPA，它可以不經(jīng)肼解直接由羧基變成疊氮化物。與傳統(tǒng)的疊氮法相比，它不需要酰肼中間體，簡化了反應(yīng)步驟，反應(yīng)條件更溫和，因此受到人們的歡迎。機(jī)理如下。

2.混合酸酐法

該方法是指將被保護(hù)氨基酸的羧基制備成高活性混合酸酐，然后與氨基縮合生成肽的方法。混合酸酐法是20世紀(jì)50年代初發(fā)展起來的。二苯基磷酸是制備混合酸酐的主要試劑，苯甲酸次之?，F(xiàn)在廣泛使用氯甲酸烷基酯，主要是氯甲酸乙酯、氯甲酸異丁酯和氯甲酸異丙酯。混合酸酐法具有反應(yīng)速度快、產(chǎn)品純度高、收率高、經(jīng)濟(jì)性好等優(yōu)點(diǎn)，因此深受當(dāng)今制藥工作者的喜愛。南京農(nóng)業(yè)大學(xué)的米鵬程等人于2007年成功合成了胸腺五肽(TP5)的中間體Fmoc-Tyr(t-Bu)-WangResin。在反應(yīng)過程中，羧基組分與氯甲酸異丁酯在低溫(-15℃)下反應(yīng)生成混合酸酐，然后在叔胺存在下，在堿性條件下與氨基組分反應(yīng)生成肽。機(jī)理如下。

3.碳化二亞胺法

在碳二亞胺法的發(fā)展過程中，二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)首先被用于肽的合成并得到廣泛應(yīng)用。DCC相對(duì)便宜，可溶于常用的肽合成試劑。然而，當(dāng)使用DCC作為縮合劑時(shí)，DCC產(chǎn)生的DCU在水和有機(jī)溶劑中具有一定的溶解度，使得在產(chǎn)品純化過程中難以消除。因此，人們開發(fā)了水溶性碳二亞胺EDC來代替DCC，只需要用酸或水洗滌就可以去除反應(yīng)后產(chǎn)生的尿素，有效地解決了這個(gè)問題。劉國渡等也用此方法合成了活性三肽囊素。碳二亞胺的縮合試劑機(jī)理如下。縮合試劑與羧基成分反應(yīng)形成活性中間體，然后與氨基成分在堿性條件下反應(yīng)完成肽鏈生長反應(yīng)。

4.酰鹵法

這種方法類似于有機(jī)化學(xué)，用酰氯活化羧基，然后在室溫或低溫下形成酰胺是常用的方法。但是這種方法只用于試劑應(yīng)用中Fmoc保護(hù)的氨基酸，因?yàn)镕moc在酸性條件下非常穩(wěn)定，而被其他保護(hù)基團(tuán)保護(hù)的氨基酸很少用這種方法合成，因?yàn)榇蠖鄶?shù)學(xué)者認(rèn)為酰氯法“活性過強(qiáng)”，容易發(fā)生外消旋等很多副反應(yīng)。

5.苯并三唑型(防噴器系列)

可以說BOP是第一代苯并三唑縮合試劑，是縮合試劑的一次革命，因?yàn)樗碾慕又π时菵CC高很多，消旋化的風(fēng)險(xiǎn)明顯降低。后來，人們發(fā)現(xiàn)了同類型的縮合試劑HBTU、ByBOP、TBTU等。共同點(diǎn)是縮合試劑在有機(jī)堿存在下與羧基成分反應(yīng)生成羧酸的苯并三唑酯活性中間體，再與氨基成分反應(yīng)生成目標(biāo)多肽，如下圖所示。

原創(chuàng)文章如有轉(zhuǎn)載，請(qǐng)注明出處“本文首發(fā)于固拓多肽合成生物科技有限公司（m.tyxjkl.com）”